厦门免费医学论文发表-用于快速诊断塔拉真菌病的商业和内部 Mp1p 抗原检测酶免疫测定的比较性能
约瑟夫·巴瓦特 ，洛蒂·布朗 ，阮氏迈图 ，保拉·冈萨雷斯，斯鲁蒂·韦努戈帕兰，希拉·纳特桑·桑巴斯，吴氏和，
抽象
背景
已经开发了几种用于快速诊断塔拉霉病的抗原检测方法，但由于缺乏商业选择，其效用受到限制。本研究的目的是将我们基于单克隆抗体的内部单克隆抗体 Mp1p 抗原检测酶免疫测定 （EIA） 的性能与其最近开发的商业平台进行头对头比较。
方法
在这项诊断准确性、回顾性、病例队列研究中，我们比较了商业万泰 Mp1p EIA 与我们内部 Mp1p EIA 的敏感性、特异性、阳性似然比 （LR+） 和阴性似然比 （LR-），对 424 名患有晚期 HIV 疾病住院的成人的配对血浆和尿液样本，其中包括 224 例已证实的塔拉霉菌病病例，其中马氏塔拉酵母在血液培养或其他临床标本中分离，200 名对照被诊断患有一系列其他机会性感染。所有参与者都是从 2011 年至 2019 年间从越南五个中心招募的前瞻性队列中随机选择的。
结果
万泰和内部 Mp1p EIA 的敏感性在血浆 （95.1% vs 92.4%，P = 0.11）、尿液 （91.5% vs 87.1% P = 0.07） 和血浆和尿液联合检测 （96.4% vs 96.0%，P = 1.00） 中具有可比性，其中根据任一标本的阳性诊断出塔拉真菌病。万泰和内部 Mp1p EIA 的特异性在血浆、尿液和联合检测中始终较高 （93 – 97%）。万泰和内部Mp1p EIA的灵敏度明显高于血培养检测（96.4%和96.0% vs 78.6%，P < 0.001）。对于两个EIA，LR+均大于10，LR-均小于0.1，这增加了排除或排除塔拉真菌病的置信度。
结论
万泰 Mp1p EIA 的诊断性能与我们经过验证的内部 Mp1p EIA 相当，并且比血液培养灵敏度高得多，为塔拉真菌病的快速诊断提供了标准化工具。
作者总结
距骨菌病是东南亚流行的一种侵袭性真菌病，已成为晚期 HIV 疾病和其他免疫功能低下患者的主要机会性感染。目前依赖于培养分离马氏木头菌的诊断不敏感，中位需要 5 天才能得出结果，并且通常需要侵入性取样。抗原检测测试有可能通过缩短诊断时间来改善距真菌病的预后，但由于缺乏商业选择，其临床效用受到限制。我们之前开发了一种酶免疫测定法 （EIA），可以检测尿液和血浆等微创临床标本中马氏锥虫的 Mp1p 抗原。我们的 Mp1p EIA 表现出比血培养更高的灵敏度，并已作为商业平台开发。在这项研究中，我们评估了商业万泰 Mp1p EIA（万泰生物制药企业有限公司，中国北京）和我们内部的 Mp1p EIA 在 424 名晚期 HIV 疾病患者中的比较诊断性能，其中包括 224 例经培养证实的塔拉真菌病病例和 200 名随机选择的对照，没有塔拉霉病的临床和培养证据。万泰和内部Mp1p EIA的敏感性和特异性在血浆（灵敏度：95% vs 92%，特异性：96% vs 93%）、尿液（灵敏度：92% vs 87%，特异性：95% vs 97%）以及血浆和尿液联合检测（灵敏度：96% vs 96%，特异性：94% vs 93%）中具有可比性。万泰和内部 Mp1p EIA 的灵敏度都明显高于血培养检测（分别为 96.4% 和 96.0% 和 78.6%）。万泰 Mp1p EIA 为快速诊断塔拉真菌病提供了标准化的市售工具。
数字
Table 4Fig 4Table 5Fig 1Table 1Fig 2Table 2Fig 3Table 3Table 4Fig 4Table 5Fig 1Table 1Fig 2
引文： Barwatt J， Brown L， Thu NTM， Gonzales P， Venugopalan S， Sambath HN， et al. （2025） 商业和内部 Mp1p 抗原检测酶免疫测定法用于快速诊断塔拉真菌病的性能比较。公共科学图书馆 Negl Trop Dis 19（8）： e0013248。 https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0013248
编辑 器： Joshua Nosanchuk，美国阿尔伯特·爱因斯坦医学院
收到： 2025 年 5 月 8 日;接受： 2025 年 6 月 16 日;发表： 8月 1， 2025
版权所有： © 2025 Barwatt 等人。这是一篇根据知识共享署名许可条款分发的开放获取文章，允许在任何媒体上不受限制地使用、分发和复制，前提是注明原作者和来源。
数据可用性： 根据越南的数据共享规定，原始数据已存入范玉他大学，并可根据要求提供（dhpnt@pnt.edu.vn）。
资金： 这项工作得到了美国国立卫生研究院的支持（授权号：R01AI143409，TL U01AI169358）。资助者在研究设计、数据收集和分析、发表决定或手稿准备方面没有任何作用。
利益争夺： 我已经阅读了该期刊的政策，这篇手稿的作者有以下相互竞争的利益：TL 已获得吉利德科学公司的研究者发起的研究资助。没有其他作者披露任何相互竞争的兴趣。
介绍
马氏木头菌，以前称为马氏青霉菌，是一种热二态性真菌，可引起侵袭性真菌病塔氏真菌病，主要影响免疫功能低下的宿主。在东南亚，距菌病是晚期HIV疾病（advanced HIV disease， AHD）患者死亡的主要原因，超过了隐球菌性脑膜炎等其他主要机会性感染[1\u20124]。据估计，每年有17300例病例和4900例死亡，主要发生在居住在东南亚的AHD患者中，但HIV以外的免疫功能低下患者和前往流行地区的旅行者中发病率正在上升[5,6]。2022年，世界卫生组织（WHO）将马氏毛虫列入真菌优先病原体名录，认识到迫切需要在塔拉真菌病的诊断和治疗方面进行研究和开发[7]。
改善塔拉罗真菌病预后的一个主要障碍是我们无法做出及时准确的诊断。如果延迟诊断，死亡率会从24%增加到50%，如果漏诊，死亡率会达到100%[8]。目前他氏真菌病的诊断依赖于在血液培养和其他临床标本中分离出马氏霉菌。然而，培养需要5-28天才能鉴定，并且只能在疾病晚期检测到塔拉真菌病，此时治疗效果最差[3,9]。即使存在播散性疾病，也有三分之一的病例血培养呈阴性，因此需要对皮损、淋巴结或骨髓进行有创取样进行诊断[9]。需要快速、无创和非培养的诊断来促进抗真菌治疗的早期开始并改善患者的预后。
我们开发了一种基于单克隆抗体（MAb）的抗原检测酶免疫测定（EIA），靶向马氏锥虫细胞壁甘露蛋白Mp1p[10]。Mp1p是马氏锥虫的重要毒力因子，具有免疫原性，在感染期间在患者的血液和尿液中大量分泌，使其成为免疫诊断的有用靶点[11]。我们已经在 372 例培养阳性病例和 517 名对照的血浆和尿液样本中验证了 Mp1p EIA，与血培养相比，表现出更高的灵敏度（86.3% vs 72.8%，P < 0.001），同时缩短了诊断时间（6 小时 vs 中位 6.6 ± 3.0 天）。我们发现，与单独检测血浆相比，血浆和尿液样本的联合检测进一步提高了灵敏度（88.8% vs 82.9%，P < 0.001）[12]。万泰（万泰生物药房企业有限公司，中国北京）开发了使用类似抗体的内部Mp1p EIA的商业化版本，并于2019年在中国获准用于临床。万泰Mp1p EIA的临床评估仅限于中国的两个队列（n = 283和n = 350）[13,14]，尚未与我们内部的Mp1p EIA进行比较分析。虽然两种 EIA 都使用相似的抗体，但方案存在一些关键差异。万泰 Mp1p EIA 使用专有的稳定试剂将多克隆抗体 （PAb） 预加载并固定到板上，从而实现长达 12 个月的保质期稳定性。相比之下，我们内部的 Mp1p EIA 板必须在使用前过夜或几天内预加载。万泰 Mp1p EIA 包含一个共孵育步骤，其中人类样本中循环的 Mp1p 抗原与抗 Mp1p 检测抗体同时相互作用。这种方法通过消除我们内部 Mp1p EIA 中所需的顺序孵育步骤，将总测定时间从 6 小时减少到 2 小时。我们研究的目的是使用经培养证明的塔拉真菌病作为参考标准，对万泰与我们内部的 Mp1p EIA 在配对临床样本中的临床性能进行稳健的头对头比较。
方法
道德声明
该诊断评估利用了作为多中心伊曲康唑与两性霉素 B 治疗青霉病 （IVAP） 随机对照试验（批准号 329/QD-BVBND）和单中心前瞻性队列研究（批准号 816//QD-BVBND）的子研究收集的存档血浆和尿液样本。该子研究得到了越南卫生部、越南所有五个研究地点和英国牛津热带研究伦理委员会的批准。所有参与者都对在本研究中储存和使用标本给予了书面知情同意书。
研究设计和人群
在这项诊断准确性病例队列研究中，纳入了2组患有AHD和培养证实的塔拉罗真菌病的住院成人（≥ 18岁）的病例：[1] 2011—2017年在越南5家转诊医院开展的伊曲康唑 vs 两性霉素B治疗青霉病（IVAP）随机对照试验[15]，以及[2] 2018 年至 2019 年在越南胡志明市热带疾病医院进行的一项前瞻性塔拉罗真菌病筛查队列研究 [16]。参考标准是在血液培养或其他临床标本（包括皮损、淋巴结和骨髓）中分离出与塔拉真菌病一致的临床综合征的受试者[17]。对照是从患有 AHD 的住院成人的前瞻性塔拉真菌病筛查队列中选择的，这些患者在 6 个月的随访期内被确定在临床上或通过血液或其他标本培养没有塔拉真菌病的证据。病例和对照是根据样本等分试样和体积的可用性从批次病例和对照中随机选择的，而不了解参与者的临床和实验室特征。血浆储存在-80oC 和尿液为 -20oC，直到它们解冻一次进行测试。
内部 Mp1p 环境影响评估
Mp1p EIA方案之前已有报道[12]。简而言之，免疫板（Nunc，Roskilde，丹麦）在4°C下用浓度为5μg/mL的兔Mp1p多克隆抗体（PAb）包被过夜，并在37°C下用0.2%明胶和0.25%酪蛋白进一步封闭在Tris碱中2小时。将 100 μL 未稀释的血浆和尿液样品等分试样加入包被孔中，并在 37°C 下孵育 1 小时。然后用0.05%吐温在磷酸盐缓冲盐水（PBS）（Sigma，圣路易斯，密苏里州，美国）中洗涤板六次。洗涤后，加入100μL与生物素偶联的1：1000稀释小鼠Mp1p MAb，在室温（25°C）下孵育30分钟，然后与链霉亲和素-辣根过氧化物酶（HRP）（Agilent-Dako，Santa Clara，California，USA）在室温（25°C）下孵育30分钟。然后加入四甲基联苯胺（Invitrogen，卡尔斯巴德，加利福尼亚州，美国）。10分钟后加入0.3M硫酸停止反应。最后，在酶联免疫吸附测定（ELISA）阅读器（ACTGene，Piscataway，New Jersey，USA）中以450nm的波长读数检查板。
商业万泰Mp1p环评
万泰 Mp1p EIA 是根据制造商的说明进行的。简而言之，将生物素偶联物（20μL）加入微孔板中，微孔板预涂有从Mp1p-Ag免疫兔中分离的多克隆Mp1p抗体。将50 μL未稀释的血浆和尿液样品等分试样加入包被孔中，并在37°C下孵育30分钟。然后用去离子水洗涤板五次。洗涤后，向每个孔中加入100μL 5%HRP偶联物，并将板在37°C下孵育30分钟。 然后用洗涤缓冲液洗涤板五次。将显色原溶液 A （50 μL） 和显色原溶液 B （50 μL） 加入每个孔中，并在 37°C 下孵育 15 分钟。通过加入终止溶液（50μL）停止反应，并在波长读数为450nm的ELISA阅读器（ACTGene，USA）中检查板。
样本量估计
样本量计算基于Hajian-Tilaki的诊断测试研究方法[18]，先前报道的内部Mp1p EIA的敏感性和特异性[12]，以及1：1的病例：对照比。189例病例和185例对照的样本量将提供80%的功效来检测Mp1p EIA的灵敏度为86%（误差d = 0.07）和特异性为94%（误差d = 0.04），α = 0.05[19]。我们的样本量为 224 个病例和 200 个对照，确保灵敏度和特异性估计的功效高于 80%。
统计分析
使用连续变量的频率和比例以及分类变量的中位数和四分位距 （IQR） 来描述参与者的基线特征。分类变量之间的比较使用卡方检验进行，而连续变量之间的比较使用 Wilcoxon 秩和检验进行。对于诊断分析，使用 GraphPad Prism 9.5.0（GraphPad Software Inc.，美国加利福尼亚州圣地亚哥）生成受试者工作特征 （ROC） 曲线。根据ROC曲线上的Youden指数确定测定临界值，该指数使真阳性最大化，假阳性最小化。对于每种检测，通过计算 ROC 曲线下面积 （AUC） 来确定病例和对照之间的区分力。计算敏感性、特异性、阳性似然比 （LR+） 和阴性似然比 （LR-） 的点估计值和 95% 置信区间 （CI）。在一项回顾性病例队列研究中，疾病患病率是人为产生的，与预测值相比，计算似然比是解释测定性能的更合适的方法，预测值取决于患病率并可能具有误导性。使用配对数据的 McNemar 检验比较 Wantai 和内部 Mp1p EIA 的敏感性和特异性。所有统计分析均使用 R 软件 4.2.2 版（R Foundation for Statistical Computing，维也纳，奥地利）进行。
结果
研究参与者的特点
图1显示了基于STARD指南的研究参与者的选择和对照的替代诊断[20]。共招募了 224 例经培养证实的塔拉真菌病病例，包括符合前瞻性塔拉罗真菌病筛查队列研究纳入标准的所有参与者 （n = 70） 和随机选择 （n = 154） 的 440 名符合条件的参与者参加 IVAP 临床试验。病例通过血培养阳性（n = 175,78.1%）、皮肤损伤（n = 141,62.9%）、淋巴结（n = 10,4.5%）和骨髓（n = 2,0.9%）诊断。对照组 （n = 200） 是从 452 名参加前瞻性筛查队列研究的参与者中随机选择的，这些参与者在 6 个月的随访期内没有证明口蕓菌病的临床或培养证据。对照被诊断出患有一系列其他机会性感染，包括口腔/食管念珠菌病（n = 141,70.5%）、肺孢子菌肺炎（n = 79,39.5%）、肺结核（n = 24,12.0%）、弓形虫病（n = 18,9.0%）和隐球菌病（n = 17,8.5%）。病例和对照组年龄相似（中位年龄 33 岁 vs 34 岁），P = 0.23。与对照组相比，病例中的男性较少（67% vs 84%，P < 0.001），注射吸毒者（PWID）较多（25% vs 15%，P = 0.02）。所有参与者的 CD4 计数均低于 200 个细胞/mL。与对照组相比，病例的中位CD4计数较低（10个细胞/mL vs 19个细胞/mL），P = 0.001（表1）。
thumbnail下载：
PPT的PowerPoint 幻灯片
巴布亚新几内亚大图
蒂夫原图
图1. 参会者选择流程图。
病例包括来自伊曲康唑与两性霉素治疗青霉病 （IVAP） 试验的 154 名参与者以及来自前瞻性塔拉霉病筛查队列研究的 70 名参与者。所有病例均经培养证实的塔拉霉菌病。对照组包括来自前瞻性距真菌病筛查研究的 200 名参与者，他们在 6 个月的随访期内没有证明距真菌病的临床或培养证据。配对的血浆和尿液标本可供所有纳入的参与者使用。病例和对照是根据样本等分试样的可用性和体积从批次病例和对照中随机选择的，而不了解患者的临床和实验室特征。缩写：PcP，肺孢子菌肺炎;属，种;结核病、肺结核。
https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0013248.g001
thumbnail下载：
PPT的PowerPoint 幻灯片
巴布亚新几内亚大图
蒂夫原图
表 1. 224 名患有他氏真菌病的参与者（病例）和 200 名没有他氏真菌病的参与者（对照）的人口统计学和实验室特征。
https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0013248.t001
血浆样本中万泰与内部 Mp1p EIA 的诊断性能
图2A显示了万泰与内部Mp1p EIA在等离子体样品中获得的病例和对照的光密度（OD）分布。两种检测的病例与对照组的OD分布存在显著差异（P < 0.001）。图2B显示了ROC曲线和相应的AUC值。万泰和内部Mp1p EIA在区分血浆疾病与无疾病方面表现出同样优异的功效，AUC为96.0%（95%CI 93.9 – 98.1%） vs 96.5%（95% CI 94.7 –98.3%），P = 0.66。根据Youden指数，血浆中万泰EIA的最佳OD临界值为0.09（非常接近商业定义的临界值0.1），内部Mp1p EIA为0.2。基于这些临界值，万泰和内部 Mp1p EIA 表现出相似的灵敏度，为 95.1% （95% CI 91.4 – 97.5%） vs 92.4% （95% CI 88.1 – 95.5%），P = 0.11，特异性相似，为 95.5% （95% CI 91.6 – 97.9%） vs 93.0% （95% CI 88.5 – 96.1%），P = 0.18。
thumbnail下载：
PPT的PowerPoint 幻灯片
巴布亚新几内亚大图
蒂夫原图
图2. 万泰与内部 Mp1p 酶免疫测定 （EIA） 在血浆中的诊断性能。
（2A） 通过万泰 Mp1p EIA（红色）与内部 Mp1p EIA（蓝色）评估的 224 例和 200 个对照的光密度 （OD） 分布在血浆中。在两种测定中，与对照组相比，病例的中位OD显着更高（P < 0.001）。（2B） 万泰 Mp1p EIA（红色）与内部 Mp1p EIA（蓝色）的接收者工作曲线 （ROC）。万泰 Mp1p EIA 的曲线下面积 （AUC） 与内部 Mp1p EIA 相似，为 96.0% vs 96.5% （P = 0.66）（DeLong 检验）。缩写：95%CI，95%置信区间;AUC，曲线下面积;OD450，波长为 450 纳米的光密度。
https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0013248.g002
万泰的阳性似然比 （LR+）（即疾病检测呈阳性的概率除以没有疾病检测呈阳性的人的可能性）为 21.1，内部 Mp1p EIA 为 13.2。值得注意的是，LR+ 为 10 或更高表示检测呈阳性的疾病概率大幅增加（+45% 或更高）。万泰的阴性似然比 （LR-）（即疾病检测呈阴性的人的概率除以没有疾病检测呈阴性的人的概率）为 0.05，而内部 Mp1p EIA 为 0.08。值得注意的是，LR-为0.1或更低表示检测阴性时无疾病概率大幅降低（-45%或更高）（表2）。
thumbnail下载：
PPT的PowerPoint 幻灯片
巴布亚新几内亚大图
蒂夫原图
表 2. Wantai与内部Mp1p EIA在血浆样品中的诊断性能比较。
https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0013248.t002
尿液样本中万泰与内部 Mp1p EIA 的诊断性能
图3A显示了万泰和内部Mp1p EIA在尿液中获得的病例和对照的OD分布。两种检测的病例与对照组的OD分布差异均有统计学意义（P < 0.001）。图3B显示了每种测定的ROC曲线和相应的AUC值。根据 Youden 指数，尿液中 Wantai 的最佳 OD 临界值为 0.09（非常接近商业定义的临界值 0.1），内部 Mp1p EIA 为 0.13。与内部Mp1p EIA相比，万泰Mp1p EIA在区分尿液中疾病和无疾病的能力略低，AUC为92.5%（95%CI 89.6 – 95.4%）和95.4%（95% CI 93.3 –97.5%），但差异未达到统计学意义P = 0.06。万泰和内部Mp1p EIA表现出相似的敏感性，分别为91.5%（95%CI 87.1 – 94.8%）和87.1%（95%CI 81.9 – 91.2%），P = 0.07，特异性相似，分别为94.5%（95%CI 90.4 – 97.2%）和97.0%（95%CI 93.6 – 98.9%），P = 0.13。尿液中万泰 Mp1p EIA 的 LR + 为 16.6，内部 Mp1p EIA 为 29.0，而万泰的 LR- 为 0.01，内部 Mp1p EIA 为 0.13（表 3）。
thumbnail下载：
PPT的PowerPoint 幻灯片
巴布亚新几内亚大图
蒂夫原图
图3. 尿液中万泰和内部 Mp1p EIA 的诊断性能。
（3A）来自万泰（红色）和内部Mp1p EIA（蓝色）的224例和200例对照的光密度（OD）在血浆上的分布。在两种测定中，与对照组相比，病例的中位 OD 显着更高 （P < 0.001）。（3B） 万泰 Mp1p EIA（红色）和内部 Mp1p EIA（蓝色）的接收者工作曲线 （ROC）。万泰 Mp1p EIA 的测试准确率或曲线下面积 （AUC） 与内部 Mp1p EIA 相似，为 92.5% vs 95.4% （P = 0.06）（德龙检验）。缩写：95%CI，95%置信区间;AUC，曲线下面积;OD450，波长为 450 纳米的光密度。
https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0013248.g003
thumbnail下载：
PPT的PowerPoint 幻灯片
巴布亚新几内亚大图
蒂夫原图
表 3. 尿液样本中万泰和内部 Mp1p EIA 的诊断性能比较。
https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0013248.t003
万泰与内部EIA在血浆和尿液样本联合检测中的诊断性能
表4显示了万泰和内部Mp1p EIA在配对血浆和尿液样本中检测培养确诊的塔拉真菌病病例的比较性能。对于血浆和尿液联合检测，根据血浆或尿液阳性诊断距骨真菌病，万泰 Mp1p EIA 的敏感性从 91.5% 和 95.1% 增加到 96.4% （95% CI 93.1 – 98.4%），内部 Mp1p EIA 的敏感性从 87.1% 和 92.4% 增加到 96.0% （92.5 – 98.1%） （P = 1.0）。两种检测均正确检测到配对血浆和尿液样本中 224 例 talaromycosis 病例中的 213 例 （95.1%）。万泰Mp1p EIA检测到另外3例，内部Mp1p EIA检测到2例（图4）。
thumbnail下载：
PPT的PowerPoint 幻灯片
巴布亚新几内亚大图
蒂夫原图
表 4. 万泰和内部 Mp1p EIA 在尿液和血浆组合样本中的性能比较。
https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0013248.t004
thumbnail下载：
PPT的PowerPoint 幻灯片
巴布亚新几内亚大图
蒂夫原图
图4. 维恩图展示了万泰和内部 Mp1p EIA 对配对血浆和尿液样本的诊断率。
万泰环评检测到96.4%的病例（216/224），内部Mp1p环评检测到96.0%的塔拉真菌病病例。缩写：+，正数;-阴性。
https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0013248.g004
万泰和内部 Mp1p EIA 与血培养检测的灵敏度
通过万泰和内部 Mp1p EIA 对尿液和血浆进行联合检测的灵敏度明显高于血培养检测（96.4% 和 96.0% vs 78.6%，P < 0.001，表 5）。单独检测尿液或血浆的灵敏度也明显高于血培养。在血培养阳性的受试者中，万泰和内部Mp1p EIA的敏感性分别为96.0%（95%CI：91.7-98.2%）和96.6%（95%CI：92.4-98.6%），P = 1.0。在血培养阴性的参与者中，万泰 Mp1p EIA （97.9%，95% CI：87.5 – 99.9%） 与内部 Mp1p EIA （93.8%，95% CI：81.8 – 98.4%） 的敏感性相似，P = 0.48（表 5）。
thumbnail下载：
PPT的PowerPoint 幻灯片
巴布亚新几内亚大图
蒂夫原图
表 5. 万泰 Mp1p EIA 和内部 Mp1p EIA 与血培养的诊断性能比较。
https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0013248.t005
假阴性和假阳性的特征
在 6 例假阴性病例中（血浆和尿液样本中的万泰和内部 Mp1p EIA 抗原均为阴性），其中 5 例通过血培养阳性诊断，1 例通过皮肤损伤培养阳性诊断。9例假阳性病例中，3例诊断为口腔/食管念珠菌病，其余6例诊断为肺孢子菌肺炎、弓形虫病和感染性腹泻。
讨论
及时诊断和治疗对于降低塔拉真菌病的高死亡率（高达30%）至关重要[5]。目前，大多数塔拉真菌病病例都是通过培养来诊断的，培养缓慢且不敏感。近年来，快速诊断的发展取得了重要进展，与血培养相比，Mp1p EIA等抗原检测测试表现出更高的灵敏度和优异性，并显着缩短了诊断和开始抗真菌治疗的时间[12]。然而，由于缺乏商业选择，这些抗原检测的效用受到限制。显然需要可靠、负担得起且广泛使用的商业抗原检测测试来改善塔拉真菌病的诊断。在这项针对越南 400 多名 AHD 参与者的多中心病例队列研究中，我们评估了商业万泰 Mp1p EIA 的敏感性和特异性，并证明了与我们经过广泛验证的内部 Mp1p EIA 相当的性能。在对血浆和尿液进行联合检测时，两种 EIA 的灵敏度进一步提高（从 87 – 95% 到 96%），这是我们推荐的抗原检测方法。然而，在不可能或无法获得两种标本类型的情况下，两种EIA中尿液或血浆的敏感性仍然大大高于血培养。万泰和内部EIA在血浆、尿液以及血浆和尿液联合检测中的特异性同样很高（93-97%）。万泰和内部 Mp1p EIA 均显示出高 LR+ （> [10]） 和低 LR- （<0.1），这表明作为 越南 年 AHD 患者距真菌病的快速、规则和排除测试具有良好的效用。
在我们的研究中观察到的假阳性和假阴性有多种可能的原因。由于人抗体与兔源性 Mp1p 抗体的非特异性结合，异性抗体干扰可能导致假阳性。虽然先前的研究没有报告Mp1p EIA与其他主要病原真菌（包括隐球菌、念珠菌、组织胞浆菌和曲霉菌）的交叉反应性，但仍有可能与不太常见的真菌发生交叉反应[12]。居住在流行地区的人群中循环 Mp1p 的基线水平尚不清楚。在没有侵袭性疾病的情况下，环境暴露可能导致可检测到的抗原血症。需要进一步的研究来定义抗原阈值，以区分高负荷环境中的真实感染和背景暴露。在我们的研究中，我们不怀疑低真菌负荷是假阴性的原因，因为六例病例中有五例经血培养呈阳性。由于 Mp1p 抗原与循环抗体的螯合、形成免疫复合物并降低游离 Mp1p 的水平，先前接触过 T. marneffei 的人可能出现假阴性。需要进一步研究来表征对马氏锥虫的适应性免疫反应。Mp1p表位的变异可能是由于不同马氏菌株的遗传多样性而产生的，这可能导致假阴性结果[21]。
此前，中国广州的两项研究对万泰Mp1p的EIA进行了评估[13,14]。这些单中心、回顾性、横断面研究检查了 Mp1p EIA 对培养的诊断性能，总共 633 名患有 AHD 和疑似塔拉真菌病的参与者。虽然这两项研究中万泰 Mp1p EIA 的高特异性 （97%） 与我们在越南的研究一致，但敏感性要低得多 （72 – 77%）。灵敏度差异的可能原因是用于EIA分析的标本类型不同（我们的研究中是血浆/尿液组合，而中国的两项研究是血清），以及研究人群的差异，中国研究包括来自已经开始接受抗真菌治疗的受试者的标本，这可能会影响敏感性。另一种可能的解释是，测定性能可能是进化枝特异性的。对马氏锥虫分离株的基因组研究揭示了显着的遗传变异和不同的地理进化枝，这可能会影响抗原检测的检测，尽管这仍然没有得到充分研究，并且是一个需要研究的领域[21]。
除了快速诊断塔拉霉病外，Mp1p抗原检测还可能在筛查、预后和监测治疗反应方面发挥作用。马氏毛滴虫抗原血症（由我们内部的Mp1p EIA检测到）已被证明比血培养阳性早16周[22]。与隐球菌性脑膜炎的血清隐球菌抗原检测（crAg）一样，塔拉真菌病的抗原检测有可能用于靶向筛查高危患者，如AHD患者和CD4 ≤ 200个细胞/mL，以促进症状出现前的早期治疗[16]。Mp1p 抗原检测还可用于监测真菌清除率和对治疗的反应，通过定量由 ELISA 的光密度读数器测定的循环 Mp1p 抗原。此外，需要前瞻性试验来确定 Mp1p 抗原检测对预后以及筛查和治疗策略（包括商业试剂盒的评估）的价值。
我们的研究存在一些局限性。首先，我们对 2012 年至 2019 年间收集的存档临床标本进行了评估。较旧样品中的蛋白质可能已经降解，这可能导致低估测定灵敏度。其次，病例和对照组的特征存在一些显着差异，包括男性参与者的比例、吸毒吸毒者患病率和中位 CD4 细胞计数。中位 CD4 计数的差异（10 个细胞/毫米3 for cases vs 19 cells/mm3 for controls) is not clinically significant since both are considered severely immunocompromised with the same risk of opportunistic infections. As a case-cohort study, our control population consisted of clinically relevant participants with AHD and other opportunistic infections, which are representative of the population at risk and being tested for talaromycosis. Control participants were followed up for a minimum of 6 months and monitored for the development of talaromycosis, which minimized the risk of misclassification of controls. Finally, our evaluation was limited to individuals with AHD living in Vietnam. Given the evolving epidemiology of talaromycosis, future evaluations should include individuals with immunocompromising disorders other than HIV and in migrants or travelers from endemic regions. Our findings should be validated in larger, prospective cohort studies of individuals with and without AHD, living across a range of endemic and non-endemic regions.
目前，万泰Mp1p EIA试剂盒仅在中国有售，该公司正在向侧流检测（LFA）平台过渡。IMMY（IMMY diagnostics，美国俄克拉荷马州）也正在开发Mp1p EIA作为商业LFA，显示出与Mp1p EIA相当的性能，并正在进行前瞻性临床验证[23]。虽然基于 EIA 的诊断需要实验室基础设施和训练有素的人员，但 LFA 测试无需设备即可轻松执行，特别适合资源匮乏和社区环境中的即时诊断。虽然特异性仍然很高（98%），但与Mp1p EIA相比，Mp1p LFA的敏感性略有降低（一项纳入292例成人AHD患者的单项研究为91% vs 95%），并且分析检测限较低[23]，这是LFA的预期。其他几种抗原检测检测方法正在积极开发中。其中包括4D1 EIA及其床旁LFA[24\u201225]，以及Mp1p D4 POCT[26]，这是一个独立的免疫测定平台，它将所有试剂集成在毛细管驱动的被动微流控盒中，以最大限度地减少用户干预并承受极端环境条件。对于塔拉真菌病等被忽视的热带疾病，医疗保健专业人员、研究人员、行业合作伙伴、政策制定者和其他利益相关者之间的合作和伙伴关系对于继续推进新型诊断技术并确保持续获得商业选择是必要的。最后，我们主张世界卫生组织承认塔拉真菌病是一种被忽视的热带病，因为这可以作为行动的催化剂，推动塔拉真菌病的研究和开发取得进展。
结论
商业万泰 Mp1p EIA 的诊断性能与我们经过广泛验证的内部 Mp1p EIA 相当，并且在诊断口癣菌病方面比血液培养更敏感。Mp1p EIA 增加了快速排除和排除 AHD 患者塔拉真菌病的信心。研究人员、行业合作伙伴和其他利益相关者需要共同努力，以改善对塔拉真菌病等被忽视疾病的快速诊断（包括商业选择）的可及性。
确认
商业 Mp1p EIA 试剂盒由中国北京万泰生物制药企业有限公司实物提供。
引用
1.江J， 孟S， 黄S， 阮Y， 卢X， 李JZ等.马氏塔拉酵母感染对华南地区HIV/AIDS患者死亡率的影响：一项回顾性队列研究。临床微生物感染。2019;25(2):233–41.PMID：29698815
查看文章考研/NCBI谷歌学术
2.Ying RS， Le T， Cai WP， Li YR， 罗 CB， 曹 Y， et al.2011-2017 年中国广东 HIV 相关塔拉罗真菌病的临床流行病学和结果。艾滋病毒医学 2020 年;21(11):729–38.PMID：33369035
查看文章考研/NCBI谷歌学术
3.Le T、Wolbers M、Chi NH、Quang VM、Chinh NT、Lan NPH 等。越南胡志明市艾滋病相关马内氏青霉感染的流行病学、季节性和结果预测因素。临床感染病 2011;52(7):945–52.PMID：21427403
查看文章考研/NCBI谷歌学术
4.莫里斯 AJ、金 HY、尼尔德 B、道 A、麦克马兰 B、阿拉斯特鲁伊-伊兹奎尔多 A 等。马氏塔拉酵母、球孢子菌属和副球孢子菌属——为世界卫生组织真菌病原体优先清单提供信息的系统评价。医学 Mycol. 2024;62（6）：myad133。PMID：38935909
查看文章考研/NCBI谷歌学术
5.Narayanasamy S、Dat VQ、Thanh NT、Ly VT、Chan JF-W、Yuen KY 等。全球呼吁将塔拉真菌病视为一种被忽视的热带病。柳叶刀球体健康。2021;9（11）：e1618–22。PMID：34678201
查看文章考研/NCBI谷歌学术
6.秦 Y、黄 X、陈 H、刘 X、李 Y、侯 J 等。ART 时代亚洲 HIV/AIDS 感染者对马氏陶菌感染的负担：系统评价和荟萃分析。BMC 感染病 2020;20(1):551.PMID：32727383
查看文章考研/NCBI谷歌学术
7.世界卫生组织真菌优先病原体清单，以指导研究、开发和公共卫生行动。2022.
8.胡 Y、张 J、李 X、杨 Y、张 Y、马 J 等。马氏青霉菌感染：中国大陆新发疾病。真菌病理学。2013;175(1–2):57–67.PMID：22983901
查看文章考研/NCBI谷歌学术
9.Supparatpinyo K、Khamwan C、Baosoung V、Nelson KE、Sirisanthana T. 东南亚播散性马内氏青霉感染。柳叶 刀。1994;344(8915):110–3.PMID：7912350
查看文章考研/NCBI谷歌学术
10.王义芬、蔡杰普、王义迪、董H、郝W、江L-X等。基于毕赤酵母表达系统来源的马氏青霉 Mp1p 的免疫测定用于诊断青霉病。公共科学图书馆一号。2011;6（12）：e28796。PMID：22205971
查看文章考研/NCBI谷歌学术
11.Woo PCY、Lau SKP、Lau CCY、Tung ETK、Chong KTK、Yang F 等。Mp1p 是 Talaromyces （Penicillium） marneffei 中的毒力因子。PLoS Negl Trop Dis. 2016;10（8）：e0004907。PMID：27560160
查看文章考研/NCBI谷歌学术
12.Thu NTM、Chan JFW、Ly VT、Ngo HT、Hien HTA、Lan NPH 等。与标准 BACTEC 血培养相比，新型 Mp1p 抗原检测酶免疫测定在诊断塔拉真菌病方面的优越性。临床感染病 2021;73（2）：e330–6。PMID：32564074
查看文章考研/NCBI谷歌学术
13.陈 X、欧 X、Wang H、Li L、Guo P、Chen X 等。马氏塔拉酵母Mp1p抗原检测可能在获得性免疫缺陷综合征患者塔拉霉病的早期诊断中发挥重要作用。真菌病理学。2022;187(2–3):205–15.PMID：35237935
查看文章考研/NCBI谷歌学术
14.龚 D、林 W、张 H、欧 X、李 L、郭 P 等。中国广东地区未接受过 HIV 感染抗逆转录病毒治疗的人群中 Mp1p 抗原筛查塔拉真菌病的评估。PLoS Negl Trop Dis. 2023;17（11）：e0011785。PMID：38011216
查看文章考研/NCBI谷歌学术
15.Le T、Kinh NV、Cuc NTK、Tung NLN、Lam NT、Thuy PTT 等。伊曲康唑或两性霉素 B 治疗 HIV 相关爪骨真菌病的试验。N Engl J Med. 2017;376(24):2329–40.PMID：28614691
查看文章考研/NCBI谷歌学术
16.Ly VT， Nhut VM， Chau NVV， Le T. HIV/AIDS 患者距骨真菌病的诊断模型。Tạp chí Y học 越南。2023;532(2).
查看文章谷歌学术
17.Brown L、Ngo T、Vo T、Li L、Cao C、Youngchim S 等。塔拉真菌病诊断的最新进展。临床传染病。2025.
查看文章谷歌学术
18.Hajian-Tilaki K. 生物医学信息学诊断测试研究中的样本量估计。J 生物医学信息。2014;48:193–204.PMID：24582925
查看文章考研/NCBI谷歌学术
19.Chow SC、Shao J、Wang H、Lokhnygina Y. 临床研究中的样本量计算。查普曼和霍尔/CRC。2017.
20.Cohen JF、Korevaar DA、Altman DG、Bruns DE、Gatsonis CA、Hooft L 等人STARD 2015 年报告诊断准确性研究指南：解释和阐述。英国医学杂志公开赛。2016;6（11）：e012799。PMID：28137831
查看文章考研/NCBI谷歌学术
21.Sephton-Clark P、Nguyen T、Hoa NT、Ashton P、van Doorn HR、Ly VT 等。病原体遗传学对越南马氏塔拉酵母种群临床表型的影响。遗传学。2023;224（4）：iyad100。PMID：37226893
查看文章考研/NCBI谷歌学术
22.Ly VT、Thanh NT、Thu NTM、Chan J、Day JN、Perfect J. 通过新型 Mp1p 抗原检测测定揭示了隐匿性马氏菌感染。传染病公开论坛。2020.
查看文章谷歌学术
23.Venugopalan S、Nguyen T、Bloss K、化学 B、Xu H、Trieu LV。用于诊断马氏木头霉菌感染的新型床旁 Mp1p 抗原侧流免疫测定法的临床验证。传染病公开论坛。2023.
查看文章谷歌学术
24.Pruksaphon K、Intaramat A、Simsiriwong P、Mongkolsuk S、Ratanabanangkoon K、Nosanchuk JD 等。一种基于酵母期特异性单克隆抗体 4D1 和 Galanthus nivalis 凝集素的廉价马氏菌感染即时免疫层析检测。PLoS Negl Trop Dis. 2021;15（5）：e0009058。PMID：33945531
查看文章考研/NCBI谷歌学术
25.Shu F， Pruksaphon K， Nosanchuk JD， Thammasit P， Youngchim S. 评估酵母相特异性单克隆抗体 4D1 和 Galanthus nivalis 凝集素夹心 ELISA 检测人尿液中的马氏真菌抗原。前细胞感染微生物。2023;13:1163868.PMID：37705932
查看文章考研/NCBI谷歌学术
26.Kinnamon DS、Heggestad JT、Liu J、Nguyen T、Ly V、Hucknall AM 等。具有环境弹性的微流控床旁免疫测定能够快速诊断口癣菌病。ACS 参议院 2023 年;8(6):2228–36.PMID：37279466
查看文章考研/NCBI谷歌学术